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  • 新冠核酸檢測實驗活動的污染控制措施及相關管理要求

    2021-10-21 admin


    導 · 讀


    科研實驗室從事新冠核酸檢測實驗活動所涉及的檢測樣本與臨床檢測實驗室的檢測樣本不同。臨床檢測樣本通常病毒載量較低,且以無機緩沖液懸浮和稀釋檢測樣本,而科研實驗室的檢測樣本通常是經過培養的病毒樣本,或采集感染動物組織和體液所制備的樣本,所以樣本中病毒載量和有機質含量較高。因此,科研實驗室在從事新冠核酸檢測實驗活動時,需要依據檢測樣本的特性,制定可靠的污染控制措施和管理規范。

    作者依據國家公開發布的新冠檢測實驗室管理規范和技術指南,結合本單位的實驗室安全管理實踐,總結出新冠核酸檢測實驗活動的污染控制措施和相關管理要求。


    感染性材料的滅活及核酸檢測實驗操作所應采用的實驗室防護等級


    1、依據國家衛健委2020年發布的《新型冠狀病毒感染的肺炎防控方案(第二版)》附件4《新型冠狀病毒感染的肺炎實驗室檢測技術指南》,及《新型冠狀病毒實驗室生物安全指南(第二版,國衛辦科教函﹝2020﹞70?號)》的要求,未經培養的臨床樣本,可在生物安全二級實驗室進行樣本滅活、核酸提取和檢測、抗原檢測、血清學檢測、生化分析等實驗操作。

    2、經過培養的病毒樣本,或采集感染動物組織或體液所制備的樣本,須在生物安全三級實驗室采用可靠的方法滅活后,轉移至生物安全二級實驗室進行核酸提取和檢測、抗原檢測、血清學檢測、生化分析等實驗操作。


    病毒污染控制措施


    1、依照國務院應對新型冠狀病毒肺炎疫情聯防聯控機制醫療救治組發布的《新型冠狀病毒肺炎防控方案 (第八版,聯防聯控機制綜發〔2021〕51號)》附件10《新冠病毒樣本采集和檢測技術指南》的要求:未經培養的臨床樣本,使用含胍鹽等滅活型采樣液的標本無需進行進一步的滅活處理,可直接進行核酸提取。而使用非滅活型采樣液的標本,按照核酸提取試劑盒的說明,取適量標本加至核酸提取裂解液中充分混勻作用一定的時間則可以有效滅活病毒。不推薦采用56℃孵育30分鐘的處理方式滅活病毒,該條件不能保障充分滅活病毒。

    2、而在生物安全三級實驗室經過培養的病毒樣本,或采集感染動物組織或體液所制備的樣本,在帶出實驗室進行核酸提取之前,須采用QIAGEN試劑盒的AVL裂解液+無水乙醇的方法滅活培養后的病毒樣本(在140ul樣本中加入560ul AVL裂解液和5ul Carrier RNA,振蕩混勻15sec,靜置作用10min后,加入560ul 無水乙醇,充分混勻15sec,靜置作用10min),采用Trizol+氯仿(在50-100mg組織制備的研磨上清液、10cm2貼壁細胞或5×106懸浮細胞中,加入1ml Trizol試劑,振蕩混勻15sec,靜置作用5min后,加入250ul氯仿,充分混勻15sec,靜置作用5min)的方法滅活經培養的病毒樣本,或采集感染動物組織或體液所制備的樣本。

    3、所有滅活的樣本,在移出生物安全柜及帶出生物安全三級實驗室之前,必須分別對主容器的外表面和次級包裝容器的內外表面,用75%乙醇或0.5%的次氯酸鈉作用5 min進行有效的消毒和滅菌。如使用次氯酸鈉消毒劑,在達到有效作用時間后,應使用75%乙醇或清水擦拭去除殘余的消毒劑,減少含氯消毒劑對容器等的腐蝕作用。


    核酸污染控制措施


    1、依照國務院應對新型冠狀病毒肺炎疫情聯防聯控機制醫療救治組發布的《新型冠狀病毒肺炎防控方案 (第八版,聯防聯控機制綜發〔2021〕51號)》附件10《新冠病毒樣本采集和檢測技術指南》的要求,新冠核酸檢測實驗室的功能分區和布局應滿足如下條件:

    ① 開展新冠病毒核酸檢測的實驗室應當設置以下區域:試劑儲存和準備區、標本制備區、擴增和產物分析區,采用集中分布或分散分布的形式。根據所采用儀器的實際情況,標本制備區、擴增和產物分析區可進行合并。集中分布形式的實驗室設置應遵循“各區獨立,單向流動(注意風向,壓力梯度走向),因地制宜,方便工作”的原則。

    ② 試劑儲存和準備區保持正壓狀態,標本制備區保持負壓狀態。為操作方便,標本的分裝以及核酸提取也可以在獨立的生物安全二級實驗室進行,提取的核酸可以轉運至標本制備區加至擴增反應液中。核酸擴增和產物分析區保持負壓狀態,壓力等于或低于標本制備區。

    2、由于對含核酸的實驗廢棄物進行高壓滅菌可導致核酸片段的擴散和污染,依照國務院應對新型冠狀病毒肺炎疫情聯防聯控機制醫療救治組發布的《新型冠狀病毒肺炎防控方案 (第八版,聯防聯控機制綜發〔2021〕51號)》附件10《新冠病毒樣本采集和檢測技術指南》和《醫療機構新型冠狀病毒核酸檢測工作手冊(試行第二版,聯防聯控機制醫療發〔2020〕313號)》的要求,從事新冠核酸檢測實驗活動的廢棄物,應按如下要求進行處置:

    ① 檢測前的非滅活標本,應裝入密封的專用廢棄物轉運袋中進行高壓蒸汽滅菌處理,隨后隨其他醫療廢棄物一起轉運出實驗室進行銷毀處理。

    ② 如為檢測前已滅活標本,則無需高壓滅活,直接按醫療廢棄物轉運出實驗室進行銷毀處理。

    ③ 核酸擴增完成后反應管不可開蓋,直接放于垃圾袋中,封好袋口,不可高壓,按一般醫療廢棄物轉移出實驗室進行銷毀處理。

    ④ 每次完成核酸檢測后,實驗室可采用固定和/或移動式紫外燈照射2小時以上,必要時可采用核酸清除劑等試劑清除實驗室殘留的核酸。



        本文摘自:未來實驗室學苑


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